Блог

Mar 18, 2023

Аналоги 25OHD и вакуумные пробирки для взятия крови существенно влияют на точность автоматизированных иммуноанализов.

Научные отчеты, том 5,

Научные отчеты, том 5, Номер статьи: 14636 (2015) Цитировать эту статью

1408 Доступов

12 цитат

Подробности о метриках

Вариации в методах количественного определения витамина D значительны, а влияние аналогов витамина D и методов взятия крови систематически не изучалось. Мы оценили влияние аналогов витамина D 25OHD2 и 3-эпи-25OHD3, а также методов сбора крови на измерение уровня витамина D, используя пять систем иммуноанализа и тандемную жидкостную хроматографию-масс-спектрометрию (ЖХ-МС/МС). Образцы сыворотки (332) были отобраны из стандартных запросов на анализ витамина D, включая образцы с 25OHD2 или 3-эпи-25OHD3 или без них, и проанализированы с использованием различных систем иммуноанализа. В образцах без 25OHD2 или 3-эпи 25OHD3 все иммуноанализы хорошо коррелировали с данными ЖХ-МС/МС. Однако система Siemens давала большое положительное среднее отклонение (12,5 нг/мл) и низкое значение Каппа при использовании пробирок с активатором свертывания и гелевым сепаратором. Когда присутствовал 25OHD2 или 3-эпи-25OHD3, корреляции и клиническое согласие снижались для всех иммуноанализов. Сыворотка 25OHD в пробирках VACUETTE с гелем и активатором свертывания крови, измеренная системой Siemens, дала значительно более высокие значения, чем образцы, собранные в пробирки VACUETTE без добавок. Систематическая ошибка уменьшилась, а клиническое согласие значительно улучшилось при использовании пробирок без добавок. В заключение, большинство автоматизированных иммуноанализов показали приемлемую корреляцию и согласие с ЖХ-МС/МС; однако аналоги 25OHD и пробирки для взятия крови резко влияли на точность.

Недавние доказательства связи между витамином D и заболеваниями костей1, диабетом2, аутоиммунными заболеваниями3, сердечно-сосудистыми заболеваниями4 и раком5, в сочетании с признанием того, что дефицит витамина D является распространенным явлением, привели к массовому увеличению количества тестов на витамин D во всем мире1,6,7. Например, в клинике Майо количество тестов на дефицит витамина D выросло на 80–90% в год6, а в нашей лаборатории количество сдаваемых тестов за последние два года удвоилось. Из-за возросшей рабочей нагрузки недавно были разработаны автоматизированные иммуноанализы. Однако существуют большие различия между методами, используемыми для проверки уровня витамина D6,8,9.

Циркулирующий 25-гидроксивитамин D (25OHD) является преобладающей формой витамина D и обычно считается наиболее надежным биомаркером концентрации витамина D в сыворотке10. 25OHD3 и 25OHD2 являются двумя основными типами 25OHD: 25OHD3 эндогенно вырабатывается у животных в коже в ответ на пребывание на солнце и может поступать с пищей через добавки, содержащие 25OHD3. 25OHD2 обнаружен в грибах. 25OHD2 или D3 можно использовать в добавках или в качестве добавок к таким продуктам, как молочные продукты1. Однако недавно был идентифицирован 3-эпи-25OHD3, эпимер 25OHD3. Хотя биологическая активность этого аналога до сих пор неясна11,12, было показано, что 3-эпи-25OHD3 вызывает перекрестную реактивность с 25OHD3 в иммуноанализах, что приводит к завышению уровней 25OHD.

Для обнаружения 25OHD были разработаны различные автоматизированные иммуноанализы. Однако, как сообщается, разница между лабораториями достигает 38%6,8,13. Кроме того, определение дефицита витамина D до сих пор остается спорным, и эти противоречия вызывают большие различия в методах. Ожидается, что такие большие различия также будут проблематичными для клинической диагностики с использованием одного и того же порогового значения дефицита витамина D для разных методов. Поэтому следует оценить клиническое единообразие различных методов.

Жидкостная хроматография с изотопным разбавлением и тандемная масс-спектрометрия (ЖХ-МС/МС) считаются золотым стандартом и эталонным методом для тестирования 25OHD14. Однако наиболее часто используемые подходы ЖХ-МС/МС и те, которые легли в основу сравнения методов, не включали разделение 3-эпи 25OHD3 от 25OHD3, поскольку это потребовало бы трудоемкого анализа с помощью хроматографии, что снизило бы эффективность обнаружения; только в отдельных исследованиях уровень 3-эпи-25OHD3 измерялся с помощью ЖХ-МС/МС14,15.